Nat Commun|中山三院腦病中心聯(lián)合香港中文大學(xué)揭示多發(fā)性硬化髓鞘再生障礙新機(jī)制

發(fā)布人:黨委宣傳科 發(fā)布日期:2024-09-29

近日,我院腦病中心邱偉團(tuán)隊(duì)聯(lián)合香港中文大學(xué)劉曉東團(tuán)隊(duì)在國(guó)際期刊Nature Communications(中科院一區(qū))發(fā)表題為 “Astrocyte Derived Clusterin Disrupts Glial Physiology to Obstruct Remyelination in Mouse Models of Demyelinating Diseases”的研究論文。我院腦病中心陳晨博士、舒崖清副教授、言誠(chéng)開(kāi)博士后為共同第一作者;我院腦病中心邱偉教授、秦峰主任醫(yī)師,香港中文大學(xué)劉曉東教授為共同通訊作者。該研究得到了陸軍軍醫(yī)大學(xué)梅峰、海南省人民醫(yī)院黃仕雄、廣東三九腦科醫(yī)院王展航等專家的支持。

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原文鏈接:https://www.nature.com/articles/s41467-024-52142-7

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多發(fā)性硬化(MS是西方人群最為常見(jiàn)的神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一(>1/10000患病率),而東方人群相對(duì)少見(jiàn)(<1/10萬(wàn)患病率),2018年中國(guó)官方將其列為罕見(jiàn)病。MS為一種經(jīng)典的免疫介導(dǎo)的脫髓鞘疾病。正常情況下,機(jī)體具備自我修復(fù)功能,能夠促使少突膠質(zhì)前體細(xì)胞(OPC)分化成少突膠質(zhì)細(xì)胞(OL)并生產(chǎn)髓鞘從而修復(fù)損傷;然而在慢性病程中,髓鞘再生過(guò)程常受阻礙,導(dǎo)致MS患者病情惡化進(jìn)展。

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1、CLUMS患者及動(dòng)物模型腦組織中表達(dá)

MS患者標(biāo)本結(jié)合已公開(kāi)發(fā)表的測(cè)序數(shù)據(jù)顯示,星形膠質(zhì)細(xì)胞(AST)在活躍的病灶區(qū)域呈現(xiàn)顯著的Clusterin(CLU)高表達(dá)。另外,在EAE和LPC誘導(dǎo)的脫髓鞘模型病灶中,也觀察到AST細(xì)胞CLU表達(dá)上調(diào)。且EAE中CLU表達(dá)水平與EAE殘疾評(píng)分存在顯著相關(guān)。然而,在銅腙誘導(dǎo)的非炎癥脫髓鞘模型中,并未出現(xiàn)CLU表達(dá)上調(diào)。證明,CLU僅在“炎性”脫髓鞘環(huán)境中AST細(xì)胞的特異性上調(diào)(圖1、圖2)。

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△圖1??CLU在MS和小鼠EAE模型中的AST中表達(dá)水平升高

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△圖2? 單細(xì)胞測(cè)序分析提示CLU在多發(fā)性硬化患者病灶中AST細(xì)胞中高表達(dá)

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2、CLU可抑制AST細(xì)胞吞噬髓鞘碎片功能

通過(guò)RNAseq,研究人員探究了CLU對(duì)AST細(xì)胞增殖和功能影響。利用體內(nèi)、外增殖實(shí)驗(yàn),研究人員成功驗(yàn)證了CLU對(duì)AST細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用。另一方面,體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)CLU可抑制AST細(xì)胞的髓鞘吞噬功能(圖3)。因此,CLU在神經(jīng)系統(tǒng)中對(duì)AST起重要作用。

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△圖3? CLU對(duì)AST和小膠質(zhì)細(xì)胞吞噬髓鞘碎片的影響

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3、CLU可損傷OLOPC并導(dǎo)致髓鞘缺失

通過(guò)RNAseq,研究發(fā)現(xiàn) CLU在3h即可顯著下調(diào)與OPC分化及髓鞘形成緊密相關(guān)的基因表達(dá)。在24h刺激后, CLU暴露與Pi3k-Akt信號(hào)通路抑制緊密相關(guān)。研究人員進(jìn)一步行體外刺激實(shí)驗(yàn),證實(shí)CLU會(huì)導(dǎo)致OPC的分化與成熟異常,同時(shí)觀察到其增殖能力下降和凋亡率上升。

基于NG2-CreERT2:: taumGFP報(bào)告小鼠的實(shí)驗(yàn)?zāi)P?,研究人員觀察到外源性CLU的持續(xù)泵入會(huì)導(dǎo)致GFP+新生髓鞘減少,以及髓鞘厚度的顯著降低。此外,利用Cre-DIO系統(tǒng)在AST過(guò)表達(dá)CLU后,也觀察到相同結(jié)果。綜上所述,在病理狀態(tài)下,AST分泌的CLU會(huì)對(duì)OPC和OL造成損傷(圖4、圖5)。

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△圖4??RNAseq顯示CLU對(duì)OPC轉(zhuǎn)錄水平的影響

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△圖5??NG2-CreERT2:: taumGFP報(bào)告小鼠及CLU特異性過(guò)表達(dá)系統(tǒng)(Cre-DIO)提示AST所分泌的CLU對(duì)OL和OPC造成損傷

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4CLU對(duì)OLOPC的損傷由VLDLR介導(dǎo)

研究發(fā)現(xiàn)OL和OPC持續(xù)穩(wěn)定地表達(dá)VLDLR,而AST細(xì)胞則主要表達(dá)ApoER2受體。研究人員進(jìn)一步采用NG2啟動(dòng)子慢病毒介導(dǎo)的特異性敲低技術(shù),針對(duì)NG2+?OPC細(xì)胞中的VLDLR進(jìn)行敲低操作。結(jié)果表明,VLDLR敲低后,OPC中的EDU+細(xì)胞比例顯著增加,而CC3+細(xì)胞比例顯著降低。因此,VLDLR的減少可以有效緩解CLU對(duì)OPC的損傷作用。

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5Pi3k-Akt通路是CLU誘導(dǎo)OPC損傷的重要機(jī)制

在體外實(shí)驗(yàn)中,研究人員通過(guò)測(cè)序揭示CLU對(duì)Pi3k-Akt通路的抑制作用。隨后,通過(guò)采用緩釋泵系統(tǒng)為外源性CLU暴露小鼠分別注射了Akt激動(dòng)劑SC79與拮抗劑MK2206。結(jié)果發(fā)現(xiàn)SC79能夠部分逆轉(zhuǎn)由CLU暴露引起的OL和OPC數(shù)量減少;MK2206則加劇OL和OPC的損害。因此,CLU通過(guò)抑制Pi3k-Akt通路,導(dǎo)致了OL和OPC的損傷。

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6、CLU敲低與敲除可提高小鼠脫髓鞘病灶的髓鞘修復(fù)

利用攜帶shCLU的AAV敲低小鼠胼胝體區(qū)的CLU表達(dá),或借助GfaABC1D-Cre-EGFP特異性地敲除CLUfl/fl小鼠胼胝體區(qū)AST細(xì)胞的CLU。隨后,對(duì)這些小鼠建立LPC脫髓鞘模型。結(jié)果顯示CLU敲低與敲除顯著提高了LPC脫髓鞘病灶區(qū)域內(nèi)OPC和OL細(xì)胞數(shù)量和髓鞘厚度。研究人員進(jìn)一步構(gòu)建了ALDH1L1-CreERT::CLUfl/fl條件敲除小鼠,并進(jìn)行EAE造模。結(jié)果顯示,條件敲除小鼠相較于對(duì)照組表現(xiàn)出較低的疾病發(fā)病水平,且其脊髓病灶中的OPC的凋亡現(xiàn)象有所緩解。提示AST細(xì)胞上CLU的敲除可能具有髓鞘保護(hù)效應(yīng)(圖6、圖7)。

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△圖6? CLU敲低可增強(qiáng)LPC導(dǎo)致的胼胝體脫髓鞘病灶的髓鞘再生

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△圖7? 敲除AST中CLU可減輕EAE發(fā)病程度及病灶內(nèi)OPC的損傷

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本研究揭示了AST在病理免疫狀態(tài)下(如MS/EAE)促進(jìn)CLU表達(dá),CLU通過(guò)作用于OPC的VLDLR受體,抑制Pi3k-Akt通路,最終損傷OPC和阻礙髓鞘再生的關(guān)鍵機(jī)制。同時(shí),該研究闡明了,MS中髓鞘損傷及再生受阻的新機(jī)制,為MS預(yù)后判斷提供了新的生物標(biāo)記物,同時(shí)為MS治療提供了全新的靶點(diǎn)和方向。

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△圖8? MS/EAE中星膠“發(fā)炎”,抑制髓鞘再生

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研究團(tuán)隊(duì)

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通訊作者

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第一作者

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我院腦病中心邱偉、舒崖清、湯常永團(tuán)隊(duì)近年來(lái)一直致力于神經(jīng)免疫病中不同膠質(zhì)細(xì)胞的功能互作及其靶向治療策略?(圖9)。團(tuán)隊(duì)近期在Nature Communications2024)、Cell Reports2024a,2024b)、Science Advances2023)、Molecular Therapy2023)、ACS Nano2022)、Glia2022)、Clinical and Translational Medicine2022)、Neurobiology of Disease2024)、Molecular Neurobiology2023)、Neuroscience Bulletin2019等國(guó)際期刊發(fā)表系列原創(chuàng)性神經(jīng)免疫病論文。本研究在星形膠質(zhì)細(xì)胞功能機(jī)制上,取得了新的進(jìn)展,為神經(jīng)免疫病的機(jī)制研究提供了新思路。

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△圖9? 神經(jīng)免疫病膠質(zhì)細(xì)胞互作研究總結(jié)圖